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昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基CW003使用介紹參考

產(chǎn)品描述

CW003培養(yǎng)基適用于sf9、High Five等昆蟲細(xì)胞懸浮培養(yǎng)和瞬時表達(dá)，含有細(xì)胞生長的全

部營養(yǎng)成分，無需添加物即可使用。

產(chǎn)品特點

? 產(chǎn)品不含血清

? 即用型培養(yǎng)基，無需添加額外成分

? 支持sf9、High Five等昆蟲細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)馴化與高密度培養(yǎng)

? 支持桿狀病毒載體表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)重組基因蛋白

基礎(chǔ)參數(shù)

產(chǎn)品使用方法

細(xì)胞馴化與傳代

1） 培養(yǎng)條件

溫度：27oC；推薦搖床轉(zhuǎn)速：110-130 rpm；傳代細(xì)胞密度控制在0.8-1.2×106 cells/mL。

2） 直接馴化

大部分情況下，培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的sf9、High Five細(xì)胞，可以直接適應(yīng)至CW003培養(yǎng)

基，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養(yǎng)基即可。

3） 漸進(jìn)式馴化

注意：選用低代次、處于對數(shù)的細(xì)胞進(jìn)行馴化。

①在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細(xì)胞生長穩(wěn)定，使用原培養(yǎng)基

+CW003培養(yǎng)基（CW003比例從25%至90%）逐漸馴化，傳代細(xì)胞密度控制在0.8-1.1×106

cells/mL，每48h進(jìn)行傳代。

②待細(xì)胞在含90%以上CW003培養(yǎng)基生長正常后，可嘗試將細(xì)胞傳代至100% CW003培養(yǎng)基

中，并連續(xù)傳代3-4次，如細(xì)胞保持穩(wěn)定生長，即已適應(yīng)至CW003培養(yǎng)基。

細(xì)胞復(fù)蘇

1） 迅速取出凍存的細(xì)胞，在37℃水浴條件下進(jìn)行快速解凍（可以在水中輕輕晃動，時間控制

在120s以內(nèi)），至凍存管內(nèi)剩余小塊冰晶。

2） 在生物安全柜中，將融化的細(xì)胞全部轉(zhuǎn)移至無菌離心管中，加入10 mL預(yù)熱至37℃的培養(yǎng)

基，離心換液（175 g，5 min）去除全部上清，加入20-30mL預(yù)熱至37℃新鮮培養(yǎng)基重懸，后

轉(zhuǎn)移至搖瓶培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

1） 凍存細(xì)胞時，要選擇處于對數(shù)、狀態(tài)良好，活力≥98%的的細(xì)胞；

2） 事先計算好凍存的細(xì)胞管數(shù)和所用的培養(yǎng)基的體積，凍存密度為2.5-3.5×107 （通常凍存

濃度為1.0-2.0×107）cells/ml/支；

3） 細(xì)胞凍存液配制：

45%新鮮培養(yǎng)基+45%原培養(yǎng)基（上清）+10%DMSO，充分混勻，存放于4℃，一般為當(dāng)

天用當(dāng)天制備；

4） 以175 g，5 min的條件離心收集細(xì)胞，棄上清，用凍存培養(yǎng)基（

4℃ ）重懸細(xì)胞；

5） 將重懸的細(xì)胞液迅速分裝細(xì)胞到無菌的凍存管中，每支1ml，并貼好標(biāo)簽；

6） 將細(xì)胞凍存管放到程序降溫凍存盒（注意填充異丙醇，4℃預(yù)冷）中，置于-80℃ 冰箱(每

分鐘下降1℃)，過夜存放后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中進(jìn)行保存。