本試劑盒采用裂解液配方在10 分鐘內(nèi)完成植物葉片、種子等的裂解、提取和純化。提取對象包
括水稻、玉米、小麥等作物,也包括多糖多酚類植物(例如棉花、馬鈴薯、鐵皮石斛等)。整個提
取過無需使用蛋白酶K 等酶類制劑。提取DNA 可用于PCR、qPCR、Sorthern Blot、分子克隆、文
庫構建等。
本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領域。
試劑盒組成
保存條件
室溫保存一年。
自備材料
無水乙醇、無DNase 和無RNase 離心管、β-巰基乙醇(選用)、RNaseA(10mg/mL,或貨號QR0101)
使用方法
1. 液氮研磨新鮮植物樣本(如葉片、種子、花蕊約20-100mg),加入700μL 裂解液DP,充分混勻,
室溫靜置1 分鐘。
備注:多糖多酚類樣本,每700μL 裂解液DP 中加入14μLβ-巰基乙醇,從而提高RNA 得率。
2. (選做)加入5μL RNase A(10mg/mL),室溫靜置5-10 分鐘。
3. 加入0.5 倍體積無水乙醇,上下顛倒混勻,12,000rpm 離心1 分鐘。
4. 取700μL 上清加入DNA 吸附柱中,12,000rpm 離心30 秒,倒掉收集管中廢液。
5. 向DNA 吸附柱中加入500μL 洗滌液DWA,12,000rpm 離心1 分鐘,倒掉收集管中廢液。
6. 向DNA 吸附柱中加入500μL 洗滌液DWB,12,000rpm 離心30 秒,倒掉收集管中廢液。
7. 重復步驟6 一次。
8. 12,000rpm 離心2 分鐘,倒掉收集管中廢液。
9 將DNA 吸附柱放入新無DNase 和無RNase 離心管中,加入30-50μL 洗脫液P,室溫放置1 分鐘。
10. 12,000rpm 離心2 分鐘,得到DNA 溶液,-80℃保存。
注意事項
1. 經(jīng)常更換手套,防止DNA 污染。
2. 使用無DNase 無RNase 的吸頭和離心管,防止DNA 降解。
3. 常更換吸頭,防止交叉污染。
4. 動作輕柔,防止基因組DNA 斷裂。
5. 為了提高洗脫效率,可提前將洗脫液P 置于65℃水浴后再使用。
15021202164
上海市楊浦區(qū)國康路100號2層
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