本試劑盒適用于真菌(例如酵母、霉菌、擔(dān)子菌)、細(xì)菌、病毒等微生物擴(kuò)增。無需研磨,無需酶
類消化處理,無需經(jīng)過硅膠膜或磁珠提取純化,只需要將樣本放入專用裂解液中,保證基因組完整
性。操作簡(jiǎn),只需要10-15 分鐘即可將裂解物產(chǎn)物作為擴(kuò)增模板,加入到2× MIC Smart Mix 中。2× MIC
Smart Mix 包含修飾的DNA 聚合酶,相較于普通PCR,具有更高的保真度和更高的產(chǎn)量。PCR 產(chǎn)物
的3’含有A 末端,可直接克隆到T 載體。
本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。
試劑盒組成
保存條件
-20oC 保存。
MIC Buffer 和2× MIC Smart Mix 長期使用可放在4℃,避免反復(fù)凍融。
需要準(zhǔn)備
金屬恒溫浴、PCR 儀
使用方法
一、不同樣品的處理方法
1. 酵母菌/細(xì)菌/病毒/霉菌等培養(yǎng)液
(1)取10μL 培養(yǎng)液和20μL MIC Buffer 充分混勻。
(2)置于55℃作用5 分鐘,溶液即為DNA 模板。
2. 酵母菌/細(xì)菌/霉菌菌落
(1)挑取單菌落置于500μL 生理鹽水中,渦旋混勻。
(2)加入20 μL MIC Buffer,充分混勻。
(3)置于55℃作用5 分鐘,溶液即為DNA 模板。
3. 蘑菇類或者組織
(1)方法一:剪取1-4mm 菌蓋或者組織,加入20μL MIC Buffer 充分混勻。
方法二:綠豆大小菌蓋或者組織塊放入組織勻漿器中研磨1-2 分鐘。取10-20μL 與20μL MIC
Buffer 充分混勻。
(2)置于55℃作用5 分鐘,溶液即為DNA 模板。
二、推薦PCR 反應(yīng)體系
三、按照以下方法設(shè)定PCR 反應(yīng)
注意事項(xiàng)
一、試劑盒使用前注意事項(xiàng)
(1)所有試劑應(yīng)按照溫度儲(chǔ)存。請(qǐng)勿反復(fù)凍融。
(2)使用前后均需要對(duì)操作區(qū)進(jìn)行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均
需使用商品化的無酶耗材。
(3)2× MIC Smart Mix 頻繁使用,可在4℃保存。長期不使用可放-20℃保存。
二、試劑盒使用過程中注意事項(xiàng)
(1)PCR 過程中推薦使用陰性對(duì)照和陽性對(duì)照。
(2)整個(gè)過程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中,減
少環(huán)境污染。
(3)2× MIC Smart Mix 包含染料,可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。
(4)為防止試劑盒污染,請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用。