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U937細(xì)胞效率轉(zhuǎn)染條件分享
更新時(shí)間:2021-08-25   點(diǎn)擊次數(shù):1698次

U937細(xì)胞效率轉(zhuǎn)染條件分享

 

轉(zhuǎn)染材料準(zhǔn)備

1、轉(zhuǎn)染試劑用量10ul

2、DNA/siRNA濃度:電訊

3、細(xì)胞密度:1*106-1*105

4、轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板:6孔板

5、轉(zhuǎn)染試劑:AD600025 Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑

6、轉(zhuǎn)染時(shí)間:15小時(shí)

7、細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清:Z7181FBS-500胎牛血清

8、細(xì)胞凍存液:L0100無(wú)血清細(xì)胞凍存液

 

操作過(guò)程:

1.提前1接種細(xì)胞細(xì)胞匯合度在60-80%左右,再進(jìn)行轉(zhuǎn)染

2. 核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照比例關(guān)系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。

3.在細(xì)胞培養(yǎng)基加入核酸復(fù)合物根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。

4.細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中不用換液。

5.分析結(jié)果質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48-72小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,48-96小時(shí)檢測(cè)mRNA或蛋白表達(dá)。若進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA轉(zhuǎn)染后9小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,48-72小時(shí)檢測(cè)mRNA或蛋白表達(dá)。


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