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感受態(tài)細胞產(chǎn)品目前在市場上的需求量很大，上海創(chuàng)凌生物生產(chǎn)研發(fā)的感受態(tài)細胞，一直受到廣大老師的好評。 在電擊感受態(tài)方面，擁有了大腸桿菌和農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)種類，提高了客戶在轉基因以及文庫構建方面的成功率。目前我公司已與多家科研院所以及公司企業(yè)展開合作交流。
 

感受態(tài)細胞概念

感受態(tài)細胞（competent cell）：理化方法誘導細胞，吸收周圍環(huán)境中的DNA分子，使其處于適攝取和容納外來DNA的生理狀態(tài)。

主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現(xiàn)一些孔洞，便于外源基因或載體進入感受態(tài)細胞。由于細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。

制作方法

CaCl2法

1.將快速生長的大腸桿菌置于經(jīng)低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內(nèi)膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區(qū)域，誘導細胞成為感受態(tài)細胞

細胞壁通透性發(fā)生變化，極易與外源DNA相粘附并在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣復合物。

聯(lián)合其它的二價金屬離子（如Mn、Co）、DMSO或還原劑等物質(zhì)處理細菌，則可使轉化率提高100～1000倍。

2.此時，將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結構會發(fā)生劇烈擾動，并隨機出現(xiàn)許多間隙，外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過復制、表達，實現(xiàn)遺傳信息的轉移，使受體細胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。

3.將轉化后的細胞在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆。

電轉法

電擊法不需要預先誘導細菌的感受態(tài)，依靠短暫的電擊，促使DNA進入細菌，轉化率能達到109~1010轉化子/ug閉環(huán)DNA。因操作簡便，愈來愈為人們所接受

意義

將構建好的載體轉入感受態(tài)細胞進行表達，不僅可以檢驗重組載體是否構建成功，主要的是感受態(tài)細胞作為重組載體的宿主可以進行后續(xù)實驗，如蛋白質(zhì)表達純化等工作。